1.培養(yǎng)溫度的要求總大腸菌群中的細(xì)菌除生活在腸道中外，在自然環(huán)境中的水與土壤中也經(jīng)常存在，但此等在自然環(huán)境中生活的大腸菌群培養(yǎng)的合適溫度為25℃左右，如在37℃培養(yǎng)則仍可生長(zhǎng)，但如將培養(yǎng)溫度再升高至44.5℃，則不再生長(zhǎng)，而直接來(lái)自糞便的大腸菌群細(xì)菌，習(xí)慣于37℃左右生長(zhǎng)，如將培養(yǎng)溫度升高至44.5℃仍可繼續(xù)生長(zhǎng)。

因此，可用提高培養(yǎng)溫度的方法將自然環(huán)境中的大腸菌群與糞便中的大腸菌群區(qū)分，兩種方法也都基于此理。
將接種好的樣品或裝有濾膜的培養(yǎng)基放入生化培養(yǎng)箱時(shí)，箱內(nèi)溫度一定要達(dá)到所要求的溫度(44.5±0.5℃)時(shí)，方可放入。

如用恒溫水浴箱時(shí)，其水面要高于接種物面，放濾膜的培養(yǎng)皿要沉到水浴箱底部。

2.加氯水樣的處理經(jīng)氯處理消毒過(guò)的水樣，水中含有一定量的余氯，使大腸菌群處于受損或受抑制狀態(tài)，在采集水樣時(shí)應(yīng)提前在采樣瓶中加硫代硫酸鈉，硫代硫酸鈉可以脫氯，使受損的細(xì)菌得以復(fù)蘇與修復(fù)，從而避免出現(xiàn)計(jì)數(shù)結(jié)果偏低甚至假陰性的現(xiàn)象。此外余氯對(duì)濾膜法培養(yǎng)的細(xì)菌其抑制作用尤為明顯，所以抽濾時(shí)應(yīng)對(duì)水樣進(jìn)行大量無(wú)菌水稀釋，以減少余氯的殘留。

3.樣品的保存采樣用的容器使用前應(yīng)蓋好瓶蓋，用牛皮紙將瓶蓋和瓶頸處包裹好，置干燥箱160℃-170℃干熱滅菌2h，或用高壓蒸汽滅菌器121℃滅菌15min。
采樣后水樣的正確保存也很重要，如保存不當(dāng)可使樣品中的大腸菌群細(xì)菌死亡或在一定條件下再生長(zhǎng)，這些都將影響檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。
檢測(cè)室接到水樣后，應(yīng)立即檢測(cè)，如因故不能檢測(cè)時(shí)，應(yīng)立即將樣品置于冰箱內(nèi)(2℃-10℃)并于2小時(shí)內(nèi)檢測(cè)。